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顯微鏡油鏡的使用及細菌的簡單染色法 一、實驗目的：1.學習並掌握普通光學顯微鏡油鏡的使用技術；2.學習微生物製片、染色的基本技術，掌握細菌的 簡單染色法及無菌操作技術； 3.觀察細菌的基本形態。 二、實驗原理：1、染色原理：用於生物染色的染料主要有鹼性染料、酸性 染料和中性染料三大類。鹼性染料的離子帶正電荷，能和 帶負電荷的物質結合。因細菌蛋白質等電點較低，當它生 長於中性、鹼性或弱酸性的溶液中時常帶負電荷，所以通 常採用鹼性染料（如美藍、結晶紫、鹼性復紅或孔雀綠 等）使其著色。酸性染料的離子帶負電荷，能與帶正電荷 的物質結合。當細菌分解糖類產酸使培養基pH下降時，細 菌所帶正電荷增加，因此易被伊紅、酸性復紅或剛果紅等 酸性染料著色。中性染料是前兩者的結合物又稱複合染 料，如伊紅美藍、伊紅天青等。簡單染色法:是只用一種染料使細菌著色以 顯示其形態的染色法，簡單染 色不能辨別細菌細胞的構造。2、顯微鏡油鏡工作原理： 利用油鏡不但能增加照明度，更主要是能增加數值口 徑，因為顯微鏡的放大效能是由其數值口徑決定的。所 謂數值口徑，即光線投射到物鏡上的最大角度（稱為鏡 口角）的一半正弦，乘上玻片與物鏡間介質的折射率所 得的乘積，可用下列公式表示： N•A=n•sinα N•A:數值孔徑 n:介質折射率 α：鏡口角的半數 顯微鏡的解析度是指顯微鏡能夠辨別兩點之間最小距離的能力。它與接物鏡的數值口徑成正比，與光波長度成反比，因此接物鏡的數值口徑愈大，光波波長愈短，則顯微鏡的分辨力愈大，被檢物體的細微結構也愈能明顯地區別出來。 能辨別兩點之間最小距離= 1/2光波長度÷數值口徑 = 1/2λ÷N•A 三 、實驗器材1、活材料： 培養18-24h的金黃色葡萄球菌 和芽孢桿菌。2、染色液和試劑： 復紅、美蘭、二甲苯、香柏油。3、器材： 載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡。四、實驗步驟：1、塗片： 取乾淨載玻片一塊，在載玻片的左、右各加一滴蒸餾水，按無菌操作法取菌塗片，左邊塗金黃色葡萄球菌，右邊塗芽孢桿菌，做成薄的塗面，注意取菌不要太多。 整個過程中要注意無菌操作。（示範無菌操作技術） 2、乾燥：讓塗片自然晾乾或者在酒精燈火焰上方文 火烘乾。 3、固定：手執玻片一端，讓菌膜朝上， 通過火焰 2-3次固定（以不燙手為宜）。4、染色：將固定過的塗片加復紅或美蘭染色1-2min。5、水洗：用水洗去塗片上的染色液。6、乾燥：將洗過的塗片放在空氣中晾乾或用吸水紙吸干。7、鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，並找出適當的視野 后，將高倍鏡轉出，在塗片上加香柏油一滴，將 油鏡頭浸入油滴中仔細調焦觀察細菌的形態。8、繪圖：9、實驗完畢后的處理：①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭乾凈： a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。 b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2—3次。 c.再用乾淨的擦鏡紙將鏡頭擦2—3次。注意擦鏡頭時向一個 方向擦拭。②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦乾淨，再用洗衣粉清洗。六、注意事項1、油浸物鏡的工作距離（指物鏡前透鏡的表面到被檢物體 之間的距離）很短，一般在0.2mm以內，再加上一般 光學顯微鏡的油浸物鏡沒有「彈簧裝置」，因此使用油浸物 鏡時要特別細心，避免由於「調焦」不慎而壓碎標本片並使 物鏡受損。2、染色過程中勿使染色液乾涸。用水沖洗后，應吸去玻片上 的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。簡介：食品（包括餐飲）藥品相關的動態資訊與食品藥品檢驗過程中遇到的食品檢驗問題，藥品檢驗問題，職稱證書評定，監管動態等，努力為食品藥品從業人員提供一個交流平台關注請點擊掃描下面的二維碼