解密：你真的了解SHED嗎？！

初識SHED

乳牙牙髓幹細胞（stem cells from human exfoliated decid-uous teeth，SHED）是早期外胚葉間充質組織頭部的神經嵴細胞遷移衍生出的牙髓間充質幹細胞。

2003年，施松濤教授等在7~8歲兒童的脫落乳牙牙髓中分離出具有高度的單克隆能力、增殖能力、體內成骨等能力的多能幹細胞，並命名為SHED。之後，多項研究進一步表明SHED具有成骨分化、成脂分化、神經細胞方向分化等多向分化潛能。且乳牙牙髓被視為生物廢棄物，數量可觀，符合倫理要求，因而漸漸成為幹細胞領域的研究熱點。

本文就SHED的基本生物學特徵、培養方法與鑒定方法、多向分化潛能及其在疾病治療中的應用的研究進展作一綜述。

SHED生物特徵

目前認為，檢驗幹細胞主要依據以下2種幹細胞特性：（1）自我更新能力；（2）產生能分化成具有專一功能的祖細胞的能力。

SHED即具備以上2 種特徵，且與牙髓幹細胞（dental pulp stem cell，DPSC）相比，SHED具有更強的增殖能力、自我更新能力、多向分化能力；且SHED端粒酶的長度為DPSC的2倍，預示其細胞活性遠高於後者。

此外，多項研究顯示，通過改變SHED培養環境，可改變SHED的增殖分化能力。

如低強度的激光療法（5 J/cm2）對營養缺乏情況下的SHED增殖起明顯的促進作用；經一定劑量的紅外線LED照射后，SHED細胞活性與成骨分化能力顯著增加；而洗必泰對SHED的增殖則起抑制作用，這將有助於人們未來將其應用於臨床。研究顯示，經深低溫儲存的SHED增殖速率、端粒酶活性及多向分化能力與自組織中提取出的新鮮SHED無異，這為乳牙牙髓幹細胞庫的建立提供條件，為多種疾病的治療提供希望。

SHED培養

環境是幹細胞研究的難題之一，目前常用的幹細胞培養方法主要是參考Miura等的方法。

其實驗步驟為將脫落的乳牙放入預冷的培養液中送至實驗室並用含雙抗的磷酸鹽緩衝液（PBS）反覆沖洗，劈開牙冠取出冠部牙髓，PBS反覆沖洗，將牙髓組織剪成1 mm3大小的小塊，用3 g/LⅠ型膠原酶及4 g/L中性蛋白酶於37 ℃下消化1h，應用70 μm濾膜過濾得到單細胞懸液，在含有體積分數為20%胎牛血清的α-MEM培養基中生長，3d後半量換液，后每2~3 d更換培養基，待細胞長至70% ~ 80%時，用0.25%的胰酶進行消化，離心棄上清液后將沉澱按1∶3進行傳代，實驗中應用相差顯微鏡可觀測到明顯的集落形成及成纖維細胞樣形態的SHED。

學術界常利用幹細胞表面的特異性標記物對其進行鑒定。其中STRO-1是早期間充質幹細胞的標誌物，是目前常用的鑒別SHED的基礎。

SHED治病

SHED具有多向分化潛能，在不同的介質誘導下可分化為不同的細胞，目前已發現其可向神經樣細胞、脂肪細胞、肝腎細胞、成骨細胞等分化。

在不同的微環境下，SHED表現出特定的分化特徵，且通過改變微環境的條件，可增強或抑制其分化能力，如同種異體的富含血小板的血漿對SHED的增殖與分化起促進作用，而洗必泰可抑制SHED多向分化能力。多個前期臨床實驗顯示，SHED 可通過抗炎效應、抗凋亡效應與旁分泌效應在自身免疫性疾病、骨缺損、皮膚潰瘍、脊髓損傷與新生兒缺血缺氧綜合征等疾病中起治療作用。

因此，越來越多的研究者專註於研究SHED的分化潛能及其在疾病治療中的作用，包括骨缺損、肝腎疾病、神經系統性疾病、自身免疫性疾病等，期望獲得新突破。

小編

SHED 自被分離以來因具有高增殖能力、自我更新能力、多向分化潛能而備受關注。

越來越多的人專註研究其多向分化潛能及在組織器官修復、疾病治療中可能發揮的作用，結合上述已知SHED可望應用於骨組織再生、肝腎疾病、神經系統性疾病、自身免疫性疾病等疾病治療，儘管目前SHED發揮作用的分子機制尚不完全被闡明，相關研究尚處於進行階段，但是，隨著越來越多的大量動物實驗的研究，SHED將在未來多種疾病治療領域產生深遠而重大的影響。

來源|中華口腔醫學研究雜誌（電子版）2016年12月第10卷第6期&醫脈通

作者|李思潔，趙瑋，中山大學光華口腔醫學院·附屬口腔醫院，廣東省口腔醫學重點實驗室