我國豬藍耳病流行發生明顯變化 出現新的變異HP-PRRSV毒株

豬藍耳病流行發生明顯變化

科學防控走出防疫誤區

眾所周知，豬高致病藍耳病病毒（HP-PRRSV）是危害養豬生產的重要病原之一。2006年的「高熱病」疫情在爆發初期就造成超過100萬頭豬只死亡，對養豬業造成重創。近年來，高致病藍耳病（HP-PRRSV）在豬場又有抬頭趨勢，嚴重影響著豬群的健康水平。有學者證實藍耳病流行發生新的變化。其中，2015年10月哈爾濱獸醫研究所動物病原監測與流行病學研究團隊就在《Journal of Virology》期刊發文首次證實2013-2014年已出現新的變異HP-PRRSV毒株，並在吉林、黑龍江等幾個省份傳播擴散，吉林省感染豬場的發病率為100％，死亡率為76.6％（230/300），說明該毒株致病性和致死率都很高。該重組HP-PRRSV同樣由北美流行毒株類NADC30株與國內HP-PRRSV毒株進行遺傳重組而成。但該重組變異株具有很強的致病性。另外，2017年6月農業大學動物醫學院副院長楊漢春博士團隊在《Infection, Genetics and Evolution》期刊上發表文章指出：重組2型PRRSV（稱為TJnh1501）是由HP-PRRSV變異株類MLV與類NADC30發生重組后具有中等毒力的毒株已在開始傳播。因此要重視藍耳病流行的新變化，科學防控走出誤區。

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重組HP-PRRSV毒株遺傳表徵

哈爾濱獸醫研究所動物病原監測與流行病學研究團隊從吉林省、黑龍江省兩個農場中分離得到具有代表性的JL580和HLJ58的開放閱讀框5（ORF5）序列。使用PhyML 3.0版軟體建立進化樹分析，結果表明：這些病毒與傳統的HP-PRRSV毒株相關性不大，屬於譜系8（圖1A）。相反，它們深深地嵌套在起源於加拿大，現在在美國和加拿大都很普遍流行的多樣化譜系1中。值得一提的是，該毒株也與2008年美國分離得到的中等毒力毒株NADC30具有一定的相關性。此外，分析這種變異HP-PRRSV多樣性的結構表明，從時間上推斷該毒株是從加拿大到美國，然後到傳入（圖1B）。在，新的HP-PRRSV毒株不僅影響吉林和黑龍江，而且已波及到華中和華南地區，其中分離的毒株包括HENAN-XINX（登錄號KF416327至KF416329），HENAN-HEB（KF416334），HENAN-JIAOZKF416333）和FJ1405（KM453701）。

在研究該病毒的遺傳表徵上，採用Marc-145細胞培養，分離得到JL580毒株並對PRRSV N蛋白單克隆抗體進行免疫熒光測定。序列比對顯示：該變異株在非結構蛋白2（nsp2）中有三個間斷不連續缺失（總共131個氨基酸），這與NADC30和MN184毒株相似但與傳統HP-PRRSV毒株不同（圖1C）。這些缺失可以用作分子標記，以區分類JL580 HP-PRRSV毒株和其他2型PRRSV毒株。重要的是，在ORF5區域，大部分變異氨基酸位於蛋白質的可變區，這說明JL580與中等毒力的NADC30更接近（圖1D）。

在重組試驗中，利用SimPlot v3.5.1軟體對基因組500-bp進行同源重組比較。結果顯示：JL580是類NADC30毒株與經典HP-PRRSV毒株重組的結果（圖2A）。圖譜顯示存在6個重組斷點：兩個位於nsp2（核苷酸[nt] 3446和4549），其他位於nsp3（nt 5225），nsp7（nt 7244），ORF2a（nt 12572）和ORF4（nt 13648）。這些斷點將基因組分為七個區域：四個與來自北美的PRRSV毒株（由NADC30代表）相同（圖2B），其餘三個與經典HP-PRRSV毒株密切相關（圖2C）。這表明該毒株從美國傳入后，與經典的HP-PRRSV毒株重組而獲得遺傳多樣性。

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重組HP-PRRSV致病性研究

哈獸研針對JL580的致病性試驗：將14隻6周齡PRRSV陰性仔豬隨機分為3組，於生物安全實驗室中飼養。A組仔豬（n = 5）：用JL580-F2（Marc-145傳代細胞培養3 ϫ 104.0 50％病毒感染量[TCID50]，肌內（1ml）和鼻內（2ml）接種，共3ml/只）。B組仔豬（n = 5）：用JL580勻漿上清液（經0.45μm濾膜過濾、PT-PCR確定不含有偽狂犬病病毒、豬細小病毒、經典豬瘟病毒或2型豬圓環病毒感染），每隻豬的JL580-F2感染量為3 ϫ 104.0拷貝。C組仔豬（n = 4）：模擬Dulbecco's改良Eagle's的方法，3ml/只進行注射。每天對試驗動物進行觀察記錄。定期（感染后0、3、7、10和14天）採集血樣，觀察結果顯示：A組和B組仔豬從第3天開始發熱（圖3A），並伴有明顯的咳嗽、厭食和身體紅斑和耳朵發紺的臨床癥狀；A組和B組的仔豬分別在7~10天和10~14天內死亡（圖3B）。在第3、7和10天收集的血清樣品檢測PRRSV呈陽性，從A組和B組的血清中對該病毒重新進行分離鑒定，並對ORF5區域進行測序以確認其原始病毒。對照組仔豬整個實驗過程沒有明顯的臨床癥狀。病理剖檢結果顯示肺部病變明顯（圖4C），鏡下呈間質性肺炎（圖4E）。試驗結論：JL580的致病性比類NADC30和CH-1a株要高，與國內HP-PRRSV相類似。

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現有疫苗依然是防控重組HP-PRRSV的有效手段

重組HP-PRRSV終究是一種PRRS病毒，對於重組HP-PRRSV的防控不需要引起恐慌，從PRRSV防控歷史來看，新的毒株層出不窮，PRRS疫苗的不可能蓋其所有，只要交叉保護力好，達到防疫效果不成問題。對於藍耳病應繼續保持綜合防控的理念：對內通過疫苗免疫和生物安全降低病毒的循環；對外做好生物安全和引種管理。降低病毒在場內的循環，除了良好的生物安全和豬群流動的管理辦法（全進全出、清群等管理模式），疫苗防疫是非常簡單實用的操作手段。

作

者

簡

介

劉叢

哈獸維科技術服務專家，執業獸醫師。研究所學歷，基礎獸醫學專業，目前從事動物獸用生物製品的推廣和技術服務工作。

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