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【首發推薦】農學:抗稻瘟病基因Pik1-H4的克隆及其互作蛋白的篩選

【首發推薦】農學:抗稻瘟病基因Pik1-H4的克隆及其互作蛋白的篩選

A: pUC-NE-Pik1-H4/pUC-CE-OsBIHD; B: pUC-NE-Pik1-H4/pUC-CE-OsCOL9

BiFC驗證Pik1-H4與互作蛋白OsBIHD、OsCOL9的相互作用

摘要: 前期的研究推測高抗稻瘟病水稻品系H4對稻瘟病菌的抗性是由Pik位點的基因介導的。為進一步確認該基因是否是Pik位點的等位基因並揭示該基因的抗病機理,對該位點基因(Pik1-H4)的編碼序列(CDS)進行了克隆,並以Pik1-H4為誘餌,採用酵母雙雜交的方法對其互作蛋白進行了篩選。結果表明,Pik1-H4基因的編碼序列全長為3.429 kb,與已經報道的Pik-h相似,僅有兩個鹼基的突變;利用酵母雙雜交系統篩選得到OsBIHD、OsCOL9等6個分別與Pik1-H4具有相互作用的蛋白。進一步對Pik1-H4與OsBIHD、OsCOL9的相互作用利用雙分子熒光互補技術(BiFC)進行了驗證,結果表明Pik1-H4僅能與OsBIHD在細胞核內存在直接的相互作用。本研究不僅克隆了介導H4抗性的基因Pik1-H4,還有助於進一步了解Pik1-H4介導的抗稻瘟病機制。

關鍵詞: Pik1-H4;酵母雙雜交;BiFC;互作蛋白

基金項目:教育部高等學校博士學科點專項科研基金新教師類(20124404120007);廣東省自然科學基金(2014A030313463)

作者:董雙玉,劉浩,王慧,陳志強,王加峰

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