KCTD13,KCNRG在COS-7細胞中的表達及分佈(綠色為外源性表達的KCTD蛋白,藍色為DAPI染的細胞核)
摘要: 目的:研究KCTD蛋白對哺乳動物TORC1(mTORC1)的調節機制。方法:免疫熒光法觀察各KCTD蛋白的表達及表徵;哺乳動物細胞的氨基酸缺乏及再刺激處理實驗篩選對mTORC1活性有抑制作用的KCTD蛋白;通過免疫印跡法檢測核糖體蛋白S6的磷酸化水平,考察TORC1活性;過表達和RNA干擾法確定KCTD11的作用。結果:免疫熒光實驗指示構建的各種KCTD質粒都能在細胞中正常表達及分佈,且這些蛋白髮揮作用的方式可能不同;哺乳動物的TORC1活性實驗篩選出對mTORC1活性有抑制作用的KCTD蛋白;過表達和敲低實驗說明人類KCTD11蛋白是mTORC1的負調節因子。結論:已篩選出對mTORC1活性有抑制作用的KCTD蛋白,如KCTD9、KCTD11、KCNRGβ。確定了KCTD11蛋白是mTORC1的負調節因子。推測人類KCTD蛋白可能是潛在的腫瘤抑制因子。
關鍵詞: TORC1信號通路;KCTD蛋白;氨基酸感應
基金項目:國家青年基金(31401197)
作者:陳相慧,滕昕辰
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